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慢病毒載體構建,包裝,純化技術服務|實驗技術服務

日期:2025-05-12 21:25
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關鍵詞:慢病毒載體構建,包裝,純化技術服務|實驗技術服務
簡介:世界****慢病毒載體構建,包裝,純化技術服務|實驗技術服務原裝**,質量保證,價格優惠。
慢病毒載體構建,包裝,純化技術服務|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。我們所有的實驗數據真實可信,我們提供原始的表達菌株和克隆質粒,客戶可以依據我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
產品品牌:慢病毒載體構建,包裝,純化技術服務|實驗技術服務   http://www.360yxmm.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
測序實驗流程:
慢病毒是逆轉錄病毒的一種,具有逆轉錄病毒的基本結構和特性:整合入宿主細胞基因組,長期表達,可用于轉基因動物制備;但也有不同于逆轉錄病毒的組份和特性:比逆轉錄病毒具有更高的滴度,不僅可以感染分裂期細胞,更重要的,還能感染非分裂期的細胞。利用慢病毒載體,可以研究啟動子的調控、過表達特定基因或沉默特定基因。
(一) 實驗流程(1和2為并列步驟)
1.慢病毒過表達質粒載體的構建
設計上下游特異性擴增引物,同時引入酶切位點,PCR(采用高保真KOD酶,3K內突變率為0%)從模板中(CDNA質粒或者文庫)調取目的基因CDS區(coding sequence)連入T載體。將CDS區從T載體上切下,裝入慢病毒過表達質粒載體。
2.慢病毒干擾質粒載體的構建
合成siRNA對應的DNA頸環結構,退火后連入慢病毒干擾質粒載體
3. 慢病毒載體的包裝與濃縮純化
制備慢病毒穿梭質粒及其輔助包裝原件載體質粒,三種質粒載體分別進行高純度無內毒素抽提,共轉染293T細胞,轉染后6 h 更換為完全培養基,培養24和48h后,分別收集富含慢病毒顆粒的細胞上清液,病毒上清液通過超離心濃縮病毒。
(二) 實驗材料
2.1慢病毒載體、包裝細胞和菌株
該病毒包裝系統為三質粒系統,組成為pspax2, pMD2G, pLVX-IRES-ZsGreen1/pLVX-shRNA2。其中質粒上的ZsGreen1表達框能表達綠色熒光蛋白(GFP)。
慢病毒載體構建包裝實驗流程如下:
1. 根據目的基因相關信息(序列,序列號等),構建含有外源基因或siRNA的重組載體;
2. 對于測序正確的重組質粒,提取和純化高質量的不含內毒素的重組質粒;
3. 使用高效重組載體和病毒包裝質粒共轉染293T 細胞,進行病毒包裝和生產,收集病毒液;
4. 濃縮、純化病毒液;
5. 用高質量的病毒液感染細胞;
6. 通過定量PCR**測定病毒滴度(高**滴定方法)和Western 分析實驗結果;
7. 用高質量的病毒液感染宿主細胞;檢測基因功能或者siRNA的沉默效率以及使用藥物進行穩定轉染細胞株的篩選,通常狀況下,篩選的細胞克隆株具有長期的表達穩定性。病毒液足夠用于一般的動物活體實驗。
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