關鍵詞:細胞轉染|實驗技術服務
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細胞轉染|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
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測序實驗流程：
一、細胞傳代
1. 試驗準備：200ul/1mlTip頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號筆，培養皿，離心管。
2. 棄掉培養皿中的培養基，用1ml的PBS溶液洗滌兩次
3. 用tip頭加入1ml Trypsin液，消化1分鐘(37℃，5%CO2 )。用手輕拍培養瓶壁，觀察到細胞完全從壁上脫落下來為止。
4. 加入1ml的含血清培養基終止反應。
5. 用Tip頭多次吹吸，使細胞完全分散開。
6. 將培養液裝入離心管中，1000rpm離心5min。
7. 用培養液重懸細胞，細胞計數后選擇0.8X106個細胞加入一個35mm培養皿。
8. 將合適體積完全培養液加入離心管中，混勻細胞后輕輕加入培養皿中，使其均勻分布。
9. 將培養皿轉入CO2培養箱中培養，**天轉染。
二、細胞轉染
1. 轉染試劑的準備
① 將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物。
② 震蕩后將試劑放在-20攝氏度保存，使用前還需震蕩。
2. 選擇合適的混合比例(1：1-1：2/脂質體體積：DNA質量)來轉染細胞。在一個轉染管中加入合適體積的無血清培養基。加入合適質量的MyoD或者EGFP的DNA，震蕩后在加入合適體積的轉染試劑，再次震蕩。
3. 將混合液在室溫放置10―15分鐘。
4. 吸去培養板中的培養基，用PBS或者無血清培養基清洗一次。
5. 加入混合液，將細胞放回培養箱中培養一個小時。
6. 到時后，根據細胞種類決定是否移除混合液，之后加入完全培養基繼續培養24-48小時。
三、**次細胞傳代
1. 在轉染后24小時，觀察實驗結果并記錄綠色熒光蛋白表達情況。
2. 再次進行細胞傳代，按照免疫染色合適的密度0.8X105個細胞/35mm培養皿將細胞重新轉入培養皿中。
3. 在正常條件下培養24小時后按照染色要求條件固定。