關(guān)鍵詞:免疫組織化學IHC技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)
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免疫組織化學IHC技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
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測序?qū)嶒灹鞒蹋?br> 免疫組織化學技術(shù)按照標記物的種類可分為免疫熒光法、免疫酶法、免疫鐵蛋白法、免疫金法及放射免疫自顯影法等。
免疫組織化學染色
SP法
1)脫蠟、水化;
2)PBS洗2~3次各5分鐘;
3)3%H2O2(80%甲醇)滴加在TMA上，室溫靜置10分鐘;
4)PBS洗2~3次各5分鐘;
5)抗原修復;
6)PBS洗2~3次各5分鐘;
7)滴加正常山羊血清封閉液,室溫20分鐘。甩去多余液體。
8)滴加Ⅰ抗50μl，室溫靜置1小時或者4℃或者37℃1小時。
9)4℃后需在37℃復溫45分鐘。
10)PBS洗3次各5分鐘;
11)滴加Ⅱ抗40~50μl，室溫靜置，或37℃1小時;
12)II抗中可加入0.05%的tween-20。
13)PBS洗3次各5分鐘;
14)DAB顯色5~10分鐘，在顯微鏡下掌握染色程度;
15)PBS或自來水沖洗10分鐘;
16)蘇木精復染2分鐘，鹽酸酒精分化;
17)自來水沖洗10~15分鐘;
18)脫水、透明、封片、鏡檢。
SABC法
1)脫蠟、水化。
2)PBS洗兩次各5分鐘。
3)用蒸餾水或PBS配置新鮮的3%H2O2，室溫封閉5~10分鐘，蒸餾水洗3次。
4)抗原修復。
5)PBS洗5分鐘。
6)滴加正常山羊血清封閉液，室溫20分鐘。甩去多余液體。
7)滴加Ⅰ抗,室溫1小時或者4℃或者37℃1小時(4℃后在37℃復溫45分鐘)。
8)PBS洗三次每次2分鐘。
9)滴加生物素化二抗,20℃~37℃20分鐘。
10)PBS洗3次每次2分鐘。
11)滴加試劑SABC，20℃~37℃20分鐘。
12)PBS洗4次每次5分鐘。
13)DAB顯色:DAB顯色試劑盒或者自配顯色劑顯色(鏡下掌握顯色程度)。
14)蒸餾水洗。蘇木素復染2分鐘、鹽酸酒精分化。
15)脫水、透明、封片、鏡檢。
抗體儲存容器應(yīng)由不吸附蛋白質(zhì)的材料制成，常用的有聚丙烯，聚碳酸酯和硼硅酸玻璃。如儲存的抗體中蛋白濃度很低(10-100mg/L)，就應(yīng)另加隔離蛋白以減少容器對抗體蛋白的吸附，隔離蛋白常用0.1%-1.0%的牛血清白蛋白。絕大多數(shù)已稀釋的抗體應(yīng)存在4℃-8℃條件下，以免凍融對抗體蛋白產(chǎn)生有害效應(yīng)。抗體原液和已分離的免疫球蛋白組分應(yīng)保存于-20℃條件下，并避免反復凍融。冷凍的抗體溶液應(yīng)置于室溫中緩慢地解凍，應(yīng)**避免用高溫快速解凍。被細菌污染的抗體常會出現(xiàn)假陽性結(jié)果，應(yīng)將污染的抗體溶液及其他試劑棄之。為防止細菌污染，可于抗體溶液中加入0.01%疊氮鈉。抗體經(jīng)真空冷凍干燥后置-20℃以下可保存3-5年。保存稀釋后的單抗應(yīng)加入0.1%疊氮鈉濃度。大多數(shù)稀釋抗體可進行冷凍保存，少數(shù)抗體可能會丟失抗原活性。大多數(shù)單抗，只要蛋白濃度適當，可在4℃下保存數(shù)月。